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分享《生化测定及其外包常见问题解答》中一个问题解答

发布日期:2019-05-16 12:34 浏览次数:

此前推荐了我们编写的《生化测定外包及其常见问题解答》,共125个常见问题。
为了增加广大用户对此书的感性认识,本次给大家分享其中第56个问题的解答,供大家参考。
56. 数据变化不符合预期
在测定之前,用户通常会根据参考文献,或者此前自己实验室的相关测定结果,对本次测定结果有一个预期变化趋势。但是,有时会出现实际测定数据的变化趋势不符合预期的情况。
56.1 检查预期的依据
从生命科学研究来看,在预期的基础上进行研究方案设计和准备样本。但是这样的预期一定要建立在坚实的依据上。
因此,当测定数据不符合预期时,首先应该回顾检查当初提出这样预期的依据是否坚实,不能刻舟求剑。
为什么在提出预期之后还要做实验和测定呢?因为预期只是预期,并不是事实。预期能否成立,还行必须通过实验来加以验证。
56.2 检查测定数据的技术重复性和样本重复性
先查找技术重复性,以及计算公式和单位,有没有问题;如果没有问题,再看样本重复性,如实查找样本质量有没有问题;如果两者都没有问题,那么就必须接受测定结果,而不是刻舟求剑!此时要做的是,如何解释结果。有时不符合预期,反而意味着研究的新意,甚至是新发现。
56.3 代谢及其调控往往是立体和网络状的
尤其值得注意的是,代谢及其调控往往是立体和多通路的。因此某种处理并不必然导致某个指标发生显著变化,包括特定化学物质的处理、转基因和基因敲除等情况。因此,出现预期之外的结果是很有可能的。
例如,一个细胞中某种成分的含量会取决于三种平衡:输入与输出,合成与降解,游离态与结合态。上述三种平衡中,任何一种平衡的偏离都可能造成该成分含量的变化。当然,还存在补偿效应,该成分含量没有变化,也不等于三种平衡就一定没有偏离。何况,参与合成的有多种酶,参与降解的同样有多种酶,因此该成分含量的变化,就有多种可能造成,存在多种不同的组合。
56.4分析密切相关指标的变化
如果选择了测定系列指标,那么由于这些指标密切相关,就可以通过相关指标的变化趋势是否一致,来判断该指标的变化是否正常,因为同时几个相关指标变化都不正常的可能性比较小。另外,其它指标的变化能否解释不符合预期的这个指标的实际变化趋势等。
56.5 改变分母,重新计算数据
就某种测定指标而言,其变化趋势除了与分子本身的变化趋势有关外,还受到分母变化趋势的很大影响。
原则上,为了准确反映该指标的变化趋势,应该选择在取样周期内不发生显著变化的另一个指标作为分母。如果取样周期内作为分母的指标本身变化激烈,就会显著改变分子的变化趋势;如果分母变化不规律,就会导致分子变化也缺乏规律。
常用的分母包括鲜重、干重、可溶性蛋白质含量、细胞数量和器官与个体的数量等等。比较罕见的还要DNA含量等等。有时候换种分母,重新计算,分子就会呈现出某种变化规律。
值得指出的是,除了考虑分母在取样周期内是否发生变化外,还需要考虑生理意义。例如,测定酶活性时常用可溶性蛋白质含量作为分母。但是,这是对生化中酶的比活力概念的误用,因为此处用的是可溶性蛋白质含量,而不是该种酶蛋白的含量,该种酶蛋白只占粗酶液中可溶性蛋白质的很少一部分。如果样本可溶性蛋白质含量不发生显著变化还好,如果发生了显著变化,就会导致酶活性变化趋势发生显著改变。更加重要的是,酶的比活力对于研究酶本身是有意义的,但是对于某种生物学现象而言,更加关注的是该酶的生理功能,此时用鲜重作为分母,应该更能反映该酶在此种生物学现象中的生理功能。